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Masson三色染色是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维，该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织，然而淡绿或苯胺蓝的分子量都很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色(淡绿)或蓝色(苯胺蓝)，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维，而胶原纤维(collagen fiber)是分布最广、含量最多的一种纤维。

• 染色稳定；
  
• 分化时间短，1～2s；
  
• 色彩清晰鲜艳；
  
• 适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；
  
• 所染切片保存时间长且不易褪色。

• 固定液：选用甲醛升汞或甲醛盐溶液
  
• 蒸馏水、系列乙醇、二甲苯或环保浸蜡脱蜡透明液

• 本染色液可以用滴染或浸染的方法染色，如片量较少建议用滴染法。
  
• 切片脱蜡应尽量干净，固定起着重要的作用，使用不同的固定液可延或缩短染色时间。
  
• 冰冻切片用乙醚-乙醇混合固定液或甲醛型固定液固定10s~3min，水洗即可染色。
  
• 取Weigert染液A、B等量混合即为Weigert铁苏木素染液，一般24h失去染色力。
  
• 酸性乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织的类别和新旧而定。
  
• 该试剂用Weigert铁苏木素染液染核，也可用Harris苏木素染液染核，但染核后颜色不够鲜艳，本染色方法主要为了区分胶原纤维和肌纤维，两者鲜艳清晰即可，可不染核。
  
• 苏木素染核(蓝色)、丽春红酸性品红染肌纤维(红色)、苯胺蓝(蓝色)或固绿(绿色)染色胶原纤维，用固绿复染可实现三色染色，用苯胺蓝只有两种颜色。
  
• 弱酸溶液可使色彩更清晰鲜艳，如使用量大可自行配制0.1～0.3%乙酸溶液予以替代。
  
• 磷钼酸的作用是将被红染的胶原纤维分化至无色或淡红色，肌纤维、纤维素仍呈红色，另外对胶原纤维起媒染作用，使胶原纤维与大分子染料更容易的结合，分化时间根据染色深浅而定，一般1～2min。
  
• Masson蓝化液亦可自行配制Scott促蓝液或0.1～1%碳酸锂水溶液予以替代。
  
• 正式染色操作开始前请先做预实验。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 切片常规脱蜡至水，用配制好的Weigert铁苏木素染色液染色5～10min。
  
• 用酸性乙醇分化液分化2~10s，水洗。
  
• 用Masson蓝化液返蓝，水洗，蒸馏水洗1min。
  
• 丽春红品红染色液染色5～10min。
  
• 在上述操作过程中按蒸馏水:弱酸溶液=2：1比例配制弱酸工作液，用弱酸工作液洗1min。
  
• 磷钼酸溶液洗1～2min，用配制好的弱酸工作液洗1min。
  
• 直接入苯胺蓝染色液中染色1～2min，用配制好的弱酸工作液洗1min。
  
• 95%乙醇快速脱水，无水乙醇脱水3次，每次5～10s。
  
• 二甲苯或脱蜡透明液透明3次，每次1～2min，中性树胶封固。